




大肠菌群检测的关键在于方法的选用,食品中大肠菌群检测有两种表示方法。
1、是以100ml(g)检样内大肠菌群较大可能数(mpn)表示,检测方法需使用gb/t 4789.3-2003<食品卫生微生物学检验大肠菌群测定>;
2、以每g(ml)样品中大肠菌群的mpn值表示,检测方法需使用gb 4789.3-2016<食品安全 食品微生物学检验 大肠菌群计数>。
3、现行食品标准中规定的大肠菌群指标以“cfu/克或cfu/毫升”为单位的,适用gb 4789.3-2016,colitag检测试剂,故检测样品前需根据产品标准认真选择方法。
例如,gb/t2717-2003酱油卫生标准中对大肠菌群的要求需使用方法一gb/t 4789.3-2003。又如gb/t 2718-2014酱油卫生标准中对大肠菌群的要求需使用方法二gb4789.3-2016。
平板计数法
大肠平板计数法检测分为两个阶段。在初培养中,选取2~3 个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿,每皿接种1ml。同时取1ml生理盐水加入另外的无菌平皿作阴性对照。迅速将 15ml~20ml冷却至 46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(vrba)加入每个平皿中。小心地旋转平皿,使培养基与样液充分混匀,等到琼脂凝固以后,再加入3ml~4mlvrba 覆盖平板表层。翻转平板铺匀后,放在 36(℃±1)℃培养18~24h。平板菌落数按照以下方法选择:选取菌落数在 15cfu~150cfu之间的平板,分别计数平板上出现的典型和的大肠菌群菌落。典型菌落呈现紫红色,并且菌落周围有红色的胆盐沉淀环,菌落直径为 不小于0.5mm。证实试验为:从vrba平板上挑取10 个不同类型的典型和菌落,分别移种到bglb肉汤管内,(36℃±1)℃培养24~48h,观察产气情况。凡是bglb肉汤管产气,就可以报告是大肠菌群阳性。证实是大肠菌群阳性的试管比例乘以以上步骤中计数的平板菌落数总数,再乘以稀释倍数,就是每g(ml)样品中大肠菌群数。
大肠菌群平板计数法操作起来比较简便,成都检测试剂,带有菌落的平板可以直接计数,还可以观察菌落特征,可见的菌落与大肠菌群量可以直接对应,便于得出定量结果,这种方法的缺点是因为大肠菌群在平板上很小,所以肉眼有时难以观察,大肠菌群检测试剂,需要用放大镜仔细辨认。验证实验需要挑选菌落,因此受人主观的影响很大,大肠检测试剂,如果没有挑对或挑取的数量不够多都可能导致假阴性结果[3]。
2016版与2003版在mpn法检测上还是有很大的区别的。首先是培养基,lst培养基中含有月桂基---盐,有一定的---作用,同时对大肠菌群会有一定的修复作用,同时相对于乳糖胆盐培养基,没有了胆盐沉淀的影响,更利于现象的观察,也正是因为这一点,2016版里没有对阳性发酵管进行分离培养和革兰氏染色等验证试验,并且国际上通用的培养基就是lst。其次,阳性发酵管进行的验证试验也不相同,2003版明显比2016版要复杂的多,操作更为繁琐,验证步骤更多。,当然也是令检测人员头疼的问题就是报告单位,也是我们忽视的问题。
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