平板计数法(tecount):该方法是统计物品含菌数的有效方法,操作的顺序是首先将样本进行适当稀释,使其中的微生物充分分散成单个细胞,取定量的稀释液进行培养使其逐渐生长成肉眼---察的菌落,然后通过稀释度和样本数量来计算菌数。但是,由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可能来自样品中的2~3或更多个细胞,因此平板菌落计数的结果往往偏低。
大肠实验步骤(—)培养基1、普通乳糖蛋白胨培养液---酸钠培养基(供平板分离用)蛋白胨 10g, 乳糖 10g,k2hpo4 3.5g,琼脂 15~20g,蒸馏水1000ml,无水---酸钠 5g,5%的碱性品红---溶液 20ml,总大肠检测系统,ph 7.2~7.4。4、培养基(emb培养基)(供发酵法平板分离用,3和4可任选一种)蛋白胨10g,杭州总大肠检测,乳糖10g,k2hpo4 2.0g,琼脂20g,蒸馏水1000ml,2%伊红(曙红)水溶液 20ml,5%美蓝(---)水溶液13ml,ph 7.2~7.4。(二)灭菌移液管、灭菌稀释水、试管、杜汉氏小管、革兰氏染色液、灭菌培养皿。(一)水样的采集供---学检验的水样,必须按一般无菌操作的基本要求采集,并---再运送、贮存过程中不受污染。水样从采集到检验不应超过4h ,总大肠检测设备,在0~4℃下保存不应超过24h ,如不能在4h 内分析,应在检验报告上注明保存时间和条件。1、自来水取样:应在水打开放水5min ,再用无菌容器接取水样,待分析。如水样内含有余氯,则采样瓶灭菌后按每500ml水样加3%na2s2o3.5h2o溶液1ml。2、江、河、湖、池自然水体取样:可用采样器,采样瓶应先灭菌。采样后,瓶内应留有空隙。如果与其他化验项目联合取样,---学分析水样应采在其他样品之前。
该检测方法是普遍采用的检测方法,相比我准的检测方法,如多管发酵及滤膜法具简便快捷,其选择性培养基具有抑制杂菌的作用,假阳性低
酶底物法为gb5750-2006收录的用于大肠检测标准方法,酶底物法是目前水中大肠检测的方法,目前以其方便快捷,总大肠检测仪,假阳性低,适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测所---。
相对于多管发酵和滤膜法,酶底物法检测步骤---减少,而且对实验环境要求不高,检测时间可减少到24小时,在日常水样监测及应急监测中具有---的应用前景,可及时检测,预防,较大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。
检测原理:
该检测方法采用大肠产生β-半乳糖苷酶分解色源底物-onpg(ortho-nitrophenyl-β-d-galactopyranoside)使培养液呈黄色。大肠埃希氏菌产生β-------酶(β-glucuronidase)分解mug(4 - methyl-umbelliferyl-β-glucuronide)使培养液在波长366 nm 紫外光下产生荧光的原理,来定性定量水中总大肠菌群、粪大肠菌群(耐热大肠菌群)及大肠埃希氏菌。
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