滤膜法(mf,membranefilter)滤膜法:是目前为流行的检测水中大肠群的方法。滤膜法的具体步骤是首先将一定量的水体样本注入0.45μm的滤膜过滤,经过抽滤,水中的---则被留在滤膜上,将滤膜贴于品红---酸钠培养基上培养24h,温度为恒温37℃,这使得菌群因发酵乳糖而使得滤膜出现紫红色,定量盘价格,通过计算滤膜上的菌落进而计算出单位样本中的大肠的数量。
用iso9308-1规定的滤膜法测定水中大肠回收率均值为94.7%,批内变异系数小于10%,检出限为500ml水样可检出1个cfu。该方法费用较低、原理简单、利于推广,但检测时间相对较长、步骤繁琐、干扰因素多,定量盘供应商,不适于大量样品的分析,无法满足污染物品快速检测需求。
酶底物法封口机检测优势
1.无需在无菌室内操作。
2.手工操作时间小于1分钟。
3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。
4.24小时即可完成定性定量分析,无需验证试验。
操作方法
一:将水样加入100ml取样瓶中,加入酶底物法检测试剂,拧紧盖子摇匀至完全溶解。
二:将样品加到定量检测盘中。
三:使用程控定量封口机对定量检测盘进行样品分配及封口。
四:将封口好的定量检测盘放在36±1℃,杭州定量盘,如需测定粪大肠菌群(耐热大肠菌群)则将培养箱设定为44.5℃,培养24h。
五:对照比色盘数阳性(显黄色,或荧光)格子数,按照使用的检测盘类型,分别查51孔或者97孔mpn表得出100毫升中大肠菌群的菌群数,对照mpn表出数据。
六:根据稀释倍数结果按公式计算结果大肠菌群(个/l)=mpn值×稀释倍数×1000ml/100ml。
每批试剂需做验证检验:向一份100ml无菌水样中接种含有粪大肠菌的质控样标准菌株,按照上述定量检测步骤操作观察结果,看结果是否在其范围内。
9 注意事项
9.1 如果水样品有背景颜色,需做一个空白试验,与标准检测结果相比较。
9.2 只可使用灭菌水,不含缓冲液的水,不含氧化剂的水进行样品稀释。
9.3 此法所用试剂只用于常规水样,定量盘销售,不可用于浓缩水样。
9.4 如水样中含有过多的氯,则加入试剂可能显蓝光,则该水样不可用此方法。
9.5 此法无需在无菌室中进行,但操作过程因避免微生物污染。
9.6 检测使用过的定量盘应灭菌后弃去。把约30个定量盘放入防爆袋中,用绳子松松的扎住袋口,放入高压蒸汽灭菌锅中,121℃高压灭菌20min后取出,在防爆袋上注明“生物垃圾已灭菌”方可弃去。
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